Ad-GFP-LC3B(GFP-LC3B腺病毒)(C3006-10ml)

Ad-GFP-LC3B， 即adenovirus expressing GFP-LC3B fusion protein，是一种可以表达GFP-LC3B融合蛋白的腺病毒，可以用于感染细胞或组织后进行细胞自噬(autophagy)的检测。 LC3是酵母自噬关键蛋白ATG8在哺乳动物中的同源蛋白。LC3最初被分析鉴定为microtubule-associated protein 1 light chain 3 (MAP1LC3)。LC3蛋白家族包括LC3A、B、C和GABARAP等亚家族，其中对于LC3B的研究最为广泛。到目前为止， LC3B被认为是细胞自噬信号通路最为关键的标志性蛋白。LC3B是一个具有125个氨基酸残基的蛋白，在蛋白合成后，被Atg4所酶切而失去了C端的22个氨基酸蛋白，从而暴露出C端的甘氨酸，人们把它命名为胞质形式的LC3B I。在细胞自噬的过程中，其C端暴露的甘氨酸经过一个类似泛素化的过程，以ATG7为E1样激活酶(E1-like activating enzyme)， 以ATG3为E2样连接酶(E2-like conjugation enzyme)，以Atg12-Atg5-Atg16复合物为E3样连接酶(E3-like ligase)，在C端甘氨酸上共价连接上磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine,PE)而成为LC3B-PE即LC3B II。与胞质定位的LC3B I不同，LC3B II定位于自噬体 (autophagosome)的内膜和外膜上。在自噬体与溶酶体融合后，自噬体外膜上的LC3B II被Atg4所酶切，而自噬体内膜上的LC3B II则被溶酶体内的蛋白酶所降解。尽管LC3B II比LC3B I的分子量要大，但由于其极强的疏水性，在SDS-PAGE电泳时，LC3B II比LC3B I迁移得更快，其表观分子量分别为14kD和16kD。在用GFP-LC3B腺病毒感染细胞后，在非自噬的情况下，荧光显微镜下GFP-LC3B以弥散的形式存在于细胞质中；而在自噬的情况下，荧光显微镜下GFP-LC3B则聚集在自噬体膜上，以斑点的形式表现出来(LC3B dots or punctae)。 自噬(Autophagy)是一种在进化上高度保守的通过溶酶体吞噬并降解部分自身组分的细胞内分解代谢途径。自噬与多种生理功能有关，在饥饿等不利的环境条件下， 细胞通过自噬降解多余或异常的细胞内组分，为细胞的生存提供能量及原材料，促进生物体的生长发育、细胞分化及对环境变化产生应答。自噬异常与多种病理过程如肿瘤、神经退行性疾病、代谢疾病、病原体感染等都有密切关系。由于细胞自噬在生理和病理过程中都有重要作用，自噬已经成为细胞生物学领域的一个新的研究热点。 Ad-GFP-LC3B是碧云天自行研发的重组腺病毒，感染后能够在靶细胞中有效表达绿色荧光蛋白(GFP)和LC3B的融合蛋白，呈现明亮的绿色荧光，可以用于细胞自噬的检测。 腺病毒感染细胞后为瞬时表达，通常不会与基因组DNA重组，不能用于筛选稳定细胞株。本产品感染体内外细胞后，有效表达时间通常不少于7天，不同细胞和组织的有效表达时间有所不同。感染10-14天后融合蛋白的表达很可能会大大减弱。 碧云天的Ad-GFP-LC3B采用了成熟的E1缺陷型重组腺病毒载体系统，感染普通的细胞后不能进行扩增和重组，从而可以有效降低本产品在活体生物中的风险。 本产品可以在表达E1的HEK293A、HEK293等适当细胞中扩增。 本产品的滴度≥1×108 pfu/ml，使用时可以按照108pfu/ml进行计算。如果按照20 MOI感染6孔板的细胞，每孔50万细胞计算，每毫升本产品共可以感染10个孔；如果按照20 MOI感染24孔板的细胞，每孔10万细胞计算，每毫升本产品共可以感染50个孔。如果MOI值提高，则相应可以感染的孔数会减少；如果MOI值降低，则相应可以感染的孔数会增加。 包装清单： 产品编号 产品名称 包装 C3006-1ml Ad-GFP-LC3B 1ml C3006-10ml Ad-GFP-LC3B 1ml×10 － 说明书 1份 保存条件： -80℃保存，一年有效。-20℃保存，1-2个月内有效。4℃保存，一周内有效。 注意事项： 反复冻融会降低病毒滴度，如有必要请在收到本产品后分装保存。病毒融解后，如果在一周内使用，可以放置于4℃。如果-80℃保存时间超过一年，可能会导致滴度下降，此时建议重新测定病毒滴度。 腺病毒感染需要细胞表面的CAR受体，请确认拟使用的细胞或组织可以被腺病毒感染。 腺病毒对不同细胞的感染效率请参考下表。 Species Cell line Origin Transduction efficiency Human 293 Embryonic Kidney 95% MCF-10A Mammary epithelium 51% MDA-MB-231 Malignant breast cancer cell 72% HepG2 Hepatocarcinoma 70% T24 Transitional cell carcinoma 37% TCCSUP Transitional cell carcinoma 53% PC-3 Prostate cancer metastases site 67% DU145 Prostate cancer metastases site 86% LNCaP Prostate cancer metastases site 69% Jurkat T cell leukemia 2% HRT Rectal tumor 5% Murine MT1A2 Mammary tumor transformed with SV40 T antigen 92% NIH 3T3 Mouse fibroblast 12% WEHI Fibrosarcoma 10% AML12 Liver 28% MS-K68 Spleen 48% EL4 T cell 2% Bovine FBRT HE1 Fetal retina transformed with Had5 E1 90% MDBK Kidney 70% FBK-34 Kidney transformed with BAd3 E1 25% BT-5705 Turbinate 28% EBL Embryonic lung 8% Porcine FPRT HE1-5 Fetal retina transformed with HAd5 E1 91% PK-15 Kidney 76% PK-M12 Kidney cell transformed with SV40 T antigen 71% PT-K75 Turbinate 22% EPL Embryonic lung 53% SBC-1765 Derived from buffy coat cells 73% 对于难转染的细胞，建议使用较高的MOI值(可以达到100、200或500MOI)同时使用促病毒感染试剂Polybrene(终浓度2~4 μg/ml)以提高腺病毒的感染效率。 本产品使用前请仔细阅读附录1《腺病毒使用安全规范》。本产品生物安全等级为Biosafety Level 1 (BSL-1)，没有确凿证据显示会导致健康成人产生疾病(Not known to consistently cause diseases in healthy adults)，可以按照常规的微生物实验操作要求进行操作(Standard microbiological practices)。 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。